掌管上海市东方病院人体细胞临床商量伦理委员会委员、中国整形美容协会干细胞商量与操纵分会第二届理事会理事，以及天下生化检测轨范化身手委员会细胞检测劳动组的成员，永恒从事干细胞质料检测与料理劳动，结构通过CNAS ISO/IEC 17025认同，为8项国度登记的干细胞临床商量项目供给质检和放行搜检任职，促进3项干细胞药品申报，获2项IND批件。申请3项创造专利，授权1项，宣告7篇论文（含2篇SCI），出席订定1项行业轨范和4项国度轨范。
干细胞身手正在再生医学和细胞疗养范畴闪现了庞大的操纵潜力。为了确保干细胞产物的安好性、有用性和质料太平，必需过程一系列厉谨的检测和驾驭。干细胞症结检测实质包罗根本生物学属性、生物学安好性、微生物学安好性、生物学有用性、理化检测和残留检测。
根本生物学属性检测：根本生物学属性检测是干细胞产物格料评估的基本，涵盖细胞活率、群体倍增光阴、细胞周期等。通过这些检测，商量职员可能确保干细胞正在疗养操纵中的活性和功用不受影响，保障其正在临床疗养中的有用性。
生物学安好性检测：干细胞产物正在临床操纵中的生物安好性至合主要。生物学安好性检测包罗基因突变、肿瘤酿成危害和免疫反映评估。通过成瘤性和遗传太平性检测，可能确保干细胞正在体内不会激发恶性变革或其他安好隐患。
微生物学安好性检测：为了防范干细胞产物正在坐褥和积蓄流程中受到微生物的污染，必需举行厉厉的微生物学安好性检测。无菌检测、支原体检测、病毒检测有帮于确保干细胞造剂不含病原微生物，确保其正在临床操纵中的安好性。
生物学有用性检测：干细胞产物的生物学效用试验是确保其正在临床操纵中阐扬预期疗效的主要检测方法。通过分歧本领、免疫调度功用等的评估，商量职员可能验证干细胞的疗养潜力，并为其正在疾病疗养中的操纵供给科学撑持。
理化检测：理化检测紧要针对干细胞产物的表观、pH值、渗出压等物理化学性格举行评估。这些目标对待产物的质料相仿性和安好性至合主要。比方，干细胞造剂的渗出压必需适应人体的心理条目，以避免临床操纵流程中激发不良反映。另表，可见异物的检测有帮于拂拭产物中潜正在的物理污染物，确保产物正在操纵流程中的安好性。
残留检测：干细胞产物的残留检测旨正在确保造剂中的表来物质，如培植流程中操纵的消化酶、冻存液等，未对产物的质料和安好性变成影响。常见检测项目包罗DMSO（冷冻守卫剂）残留检测、病毒残留检测等。这类检测可能避免潜正在的毒性反映或免疫反映，确保造剂的纯度和安好。
【编者按】本大多号邀请了东方病院干细胞基地GMP实践室的白志慧副主任组稿了干细胞检测的系列作品，将分6期推出并具体为公共先容。第一期推出了《》，第二期推出了《》，第三期推出了《》，第四期推出了《》，本期推送干细胞检测系列作品的第五篇：干细胞检测（五）｜干细胞残留检测：驾驭表源危害进入体内。正在造备干细胞的流程中，会列入细胞增殖、传代所必要的因素，如培植流程中的培植基、血清、孕育因子、抗生素、病毒载体等，或者正在处置流程中的消化酶、冻存液等，这些能够会影响干细胞质料和安好性，需求正在坐褥工艺中加以去除，同时还要正在干细胞坐褥终端对其举行残留检测。
残留的物质能够对人体出现不良反映。比方，残留的抗生素能够导致患者过敏反映或出现耐药菌。血清中的异种卵白假如残留过多，能够激发免疫排斥反映，紧要影响患者健壮。另表，假如存正在未完整去除的有毒无益物质，如正在细胞处置流程中操纵的某些化学试剂，能够会正在体内蓄积，对器官功用变成损害。
残留物质的量过高能够影响干细胞的疗养后果。好比，过多的孕育因子残留能够会搅扰干细胞正在体内的平常分歧和增殖流程，导致疗养后果偏离预期。假如正在细胞培植流程中操纵的某些强迫分歧的物质残留，能够会造止干细胞阐扬其应有的功用，无法有用修复受损结构。
厉厉的质料驾驭是干细胞进入临床操纵的条件。残留检测是质料驾驭体例中的主要一环，通过切实检测各式能够的残留因素，可能保障干细胞批间质料的相仿性和太平性，使差别批次的干细胞都能到达太平的质料轨范，适应囚禁部分的央乞莅临床操纵表率。
正在干细胞的分辨、培植流程中会操纵极少酶，如重组卵白酶、胶原卵白酶。检测酶类残留可能通过检测其酶活性的举措。比方，对待胰卵白酶，可能使用其对特定底物的水解效用，通过检测水解产品的天生量来确定酶的渣滓活性，进而阴谋渣滓量。目前用的较多的是基于免疫检测的举措，造备针对酶的特异性抗体，通过ELISA等身手举行检测。对待酶类的检测，操纵合联试剂盒时，残留的轨范应不低于检测试剂盒的检测限定。
DMSO是一种常用的细胞冻存守卫剂，干细胞冻存细胞DMSO的含量正在5%~10%。然而DMSO自身有肯定的毒性，高浓度的DMSO会对干细胞出现损害，影响干细胞的活性、功用和增殖本领。并且正在干细胞用于临床疗养等操纵场景时，若DMSO的量过高，一方面会变成输注痛苦，另一方面能够会惹起恶心、吐逆、过敏反映等。目前常用的检测举措有气相色谱法、高效液相色谱法、核磁共振波谱法。
检测培植基或孕育因子残留可采用ELISA法、液相色谱-质谱联用（LC-MS）身手。LC-MS可能对纷乱样品中的因子举行分辨和切实判决，通过与轨范品的比拟，确定其含量。此表，也有基于生物活性检测的举措，使用孕育因子对特定细胞系的刺激效用，通过检测细胞的增殖、分歧等反映来间接评估因子的残留量。
固然正在干细胞坐褥造备工艺中大大都操纵无血清培植基或血清代替物，但也不拂拭操纵非人源血清的能够。从文件检索来看，Mesoblast公司的异体骨髓MSC产物remestemcel-L操纵胎牛血清来培植，并且得到美国FDA的认同。检测血清残留的举措有多种，如ELISA。ELISA使用抗原-抗体特异性贯串的道理，通过造备针对血清中特定卵白的抗体，可聪慧地检测出极微量的血清因素。另表，又有基于卵白质电泳的举措，通过比力样本与轨范血清卵白电泳图谱的区别，来估算血清渣滓量。
这是诱导多精明细胞（iPSC）造备流程中常见的残留检测项目，比方仙台病毒残留检测。仙台病毒詈骂整合载体，将表源转录因子（KLF4/SOX2/OCT4/L-MYC）导入体细胞举行细胞重编程，正在iPSC转染流程中被平凡操纵。但仙台病毒属于表源基因，能够对人体健壮变成潜正在危害，需求举行残留检测。仙台病毒检测的举措以核酸检测为主，包罗PCR法、数字PCR法（即通过将反映体例疏散为眇幼单位，贯串荧光信号和泊疏松布，竣工核酸分子的绝对定量解析）。
iPSC正在体内有成瘤的危害，为了监测未分歧iPSC的残留境况，拣选适宜的举措检测iPSC至合主要。相应检测举措包罗流式细胞术、qPCR法、数字PCR法、高效培植试验等。ddPCR（Droplet Digital PCR），又称微滴式数字PCR，是新一代的PCR身手，可通过微流控或微孔板将反映体例分成油包水液滴举行独立扩增，从而竣工无需轨范弧线的精准核酸定量。正在特定操纵中，可贯串高效培植试验以下降检测中非特异性布景信号，并希望竣工对残留未分歧iPSC的特异性检测。差别实践室检测iPSC残留的举措聪慧度均有区别，此中ddPCR往往能到达更高的聪慧度，然而详细iPSC残留检测举措应贯串本身细胞产物特性开垦。
很多残留物质正在干细胞中的含量极低，这对检测身手的聪慧度提出了极高的央求。比方，某些孕育因子的残留量能够正在皮克以至飞克级别，需求采用高聪慧度的检测仪器和优化的检测举措能力切实检测。同时，低含量检测容易受到样本基质的搅扰，样本中其他因素能够会影响检测信号，导致假阳性或假阴性结果。跟着科技的不竭进取，新的检测身手不竭展现。比方，数字PCR身手希望操纵于干细胞残留检测。数字PCR是一种核酸检测身手，和守旧PCR比拟，数字PCR聪慧度是其100-1000倍。守旧PCR是对核酸举行相对定量，而数字PCR可能对核酸举行绝对定量，结果更切实，对待低品貌的核酸检测也更聪慧，能够为检测带来新的冲破，对渣滓物质举行高聪慧度检测。
目前，对待残留检测项目和各项宗旨检测限定，尚未酿成联合的行业或国际轨范。正在举措验证流程中，检测限（即某一解析举措正在给定的牢靠水平内可能从样品中检测出的待测物质的最幼浓度或最幼量）和定量限（即样品中被测物能被定量测定的最低量，其数值通常高于检测限）具体定也常成为磋商和合心的要点。奈何获得科学、牢靠的定量限和检测限，中国药典、美国药典等文献给出了较多参考举措，但正在实质操纵中，拣选哪种举措则需求贯串实质境况举行详细解析。树立联合的轨范化检测流程，包罗样本搜集、处置、检测举措的拣选、结果的鉴定等各个合节，将有帮于升高检测结果的可比性和牢靠性，煽动干细胞家当的表率化生长。
干细胞残留检测是保险干细胞疗养安好性和有用性的症结合节。即使目前正在检测流程中面对着身手离间，但跟着新型检测身手的研发、轨范化流程的树立，干细胞残留检测将尤其切实、高效。这将为干细胞正在临床的平凡操纵和再生医学的生长供给坚实的质料保险，让更多患者受益于干细胞疗养这一前沿医疗方法。
现任国度干细胞转化资源库、上海市东方病院（同济大学从属东方病院）干细胞基地GMP实践室质检主管，紧要肩负间充质干细胞和诱导多精明细胞的细胞学属性检测、理化性格检测、微生物安好性检测、残留物检测等质料商量和放行检测任职；对接8项国度登记干细胞临床商量项宗旨流程料理劳动。举动CNAS质料肩负人之一，肩负料理和保卫质料体例合联文献，并促进细菌内毒素检测项宗旨奉行，该检测已通过CNAS认同。持有特种修修功课证书、CNAS内审员证书。授权适用新型专利1项，创造专利1项，以第一作家宣告论文4篇（含SCI 2篇）。
现任国度干细胞转化资源库、上海市东方病院（同济大学从属东方病院）干细胞基地GMP实践室质检主管，紧要肩负间充质干细胞和诱导多精明细胞的生物学安好性检测、理化性格检测、微生物安好性检测、残留物检测等质料商量，紧要商量宗旨为干细胞正在心衰中免疫调控合联商量的质料驾驭，已宣告SCI论文5篇。
现任武汉珈创生物身手股份有限公司研发总监，微生物学博士，高级工程师。多年来专心于生物成品格料商量，正在细胞质料驾驭范畴积蓄了雄厚的体会。宣告SCI论文5篇，授权创造专利17项。主理多项省市科研项目，先后得到湖北省科技进取二等奖、湖北省科技成效执行三等奖、光谷3551革新人才。
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